白细胞精子症与宫腔内人工授精周期临床妊娠率的关系
文章导读:分析在本中心行IUI男性患者的精液检查结果,根据WHO推荐方法对185例男性患者的精液质量进行分析,采用联苯胺染色法检测精液白细胞浓度,并将患者分为白细胞精子症不育患者组(白细胞浓度>1×106/mL,n=33)和精液白细胞正常不育患者组(白细胞浓度≤1×106/mL,n=152)。比较两组间的精液量、精子浓度、精子正常形态率、处理前后前向运动精子总数、精子DNA碎片指数、周期临床妊娠率等方面的差异。结果:白细胞精子症不育组行IUI共47个周期,白细胞正常不育组行IUI共279个周期。两组间精液量、精子浓度、处理前后前向运动精子总数无显著性差异(P>0.05)。在精子正常形态率方面,白细胞精子症患者不育组低于白细胞正常不育患者组,有统计学意义(P<0.05)。精子DNA碎片指数方面,白细胞精子症患者不育组临床妊娠率高于白细胞正常不育患者组,有统计学意义(P<0.05)。但是,在临床妊娠率数据中,我们发现白细胞精子症患者不育组与白细胞正常不育患者组无显著差异(P>0.05)。 |
据不完全统计,全世界约有15%的夫妇罹患不育症,不育原因中30%~40%与男性因素有关,约20%单独由男方因素引起,所有影响精子产生,降低精子功能的因素都可导致男性不育。男性生殖道感染是导致男性不育的主要原因之一,白细胞存在于男性的生殖道中,WHO规定精液中的白细胞密度≥1×106/mL即可诊断为白细胞精子症。白细胞精子症在男性不育中约占10%~20%。相关研究认为男性不育与白细胞精子症有密切关系。Aziz等认为白细胞精子症影响了精子形态及精液活性氧水平;目前,白细胞精子症对男性不育的影响机制主要集中在活性氧对DNA损伤方面,确切机制尚不清楚。本文旨在探讨分析白细胞精子症与IUI周期临床妊娠率的关系。
1 资料与方法
1.1 病例选择
本研究中185例均为2014年2月至2015年12月期间在我院生殖医学中心接受IUI治疗的不育症患者,共完成326周期的治疗。IUI治疗均严格按照辅助生殖技术规范所规定的适应症,女方卵巢、子宫检查、内分泌检测等均未见异常,至少有一侧输卵管保持通畅。男方IUI术前常规行精液常规分析,精液白细胞检查,精子DNA碎片检测以及支原体、衣原体培养,男方精液处理后前向运动精子总数>1×106个。本研究均获得医院伦理委员会批准,所有患者均签署知情同意书。
1.2 精液采集与处理
按照(WHO)《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第5版)的标准进行检测并做好质量控制。男方术前禁欲3~7d,手淫法取精液至无菌取精杯中,记录精液量,放入37℃水浴箱内充分液化。在治疗前常规进行精液白细胞检测,采用的是精液白细胞过氧化物酶染色试剂盒(正甲苯胺染色法),取新鲜混匀精液1滴于载玻片上,加入1滴联苯胺染液,震荡2min,盖盖玻片于37℃放置20min后镜检。按1×106/mL为标准,≤1×106/mL为白细胞正常,>1×106/mL白细胞异常。根据检测结果将IUI周期分成两个组:白细胞精子症不育组和精液白细胞正常不育组,其中白细胞精子症不育患者组47周期,精液白细胞正常不育患者组279周期。精液液化后用西班牙SCA精液分析仪对精液进行常规参数检测,记录精液量、精子浓度、处理前精子前向运动总数。精子DNA碎片指数(DFI)使用安徽安科生物工程有限公司精子DNA碎片染色试剂盒进行检测,按照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》第5版将25%定为精子DNA损伤的正常临界值。采用密度度梯度离心法对精液进行处理,待精液完全液化后,先用吸管在离心管的底部加入1mL 80%浓度梯度液(Quinn’s,美国),在其上层缓缓加入1mL 40%梯度液,在最上层缓缓加入2mL精液,100 rpm离心20min;去上层液体,收集底层精子转移到含3mL精子冲洗培养基(Quinn’s,美国)的离心管中,400rpm离心5min;去上清,向沉淀加0.5mL新鲜培养液,混匀作为授精液,取少量用于分析处理后精子前向运动总数,方法同前所述,剩余精子用于授精。
1.3 AIH-IUI
自然周期是在周期第11d左右开始B超监测卵泡发育,卵泡达到18mm直径以上时,注射HCG 5000~10000单位。诱导排卵周期:克罗米芬组,月经周期第3~7d口服克罗米芬50~100mg/d,第8d开始监测卵泡。克罗米芬+HMG组,月经第3~7d口服克罗米芬50~100mg/d,第4、6、8、10d注射HMG 75IU,第9~11d开始监测卵泡,阴道超声监测到卵泡直径达到18~20mm时,肌肉注射HCG 5000~10000单位,24~48h后行IUI。授精方法:患者排空膀胱后取截石位,生理盐水抹洗外阴阴道后,用1mL注射器接专用的IUI导管抽取洗涤后的精液0.3~0.5mL,将导管插入宫腔,缓慢将授精液注入宫腔,保持仰卧位30min。术后15d抽血测β-绒毛膜促性腺激素,及孕酮,术后28~30d行阴道B超检查孕囊情况,明确是否临床妊娠。
1.4 统计学分析
分别比较两组患者间男方精液量、精子浓度、精子正常形态率、处理前后前向运动精子总数、精子DNA碎片指数、临床妊娠率等方面的差异。应用SPSS16.0统计软件进行数据处理及统计学分析,计量资料的数据采用t检验,率的比较采用χ2检验,P<0.05时差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者一般情况比较
本研究中,精液白细胞正常不育患者组女方平均年龄(27.4±3.2)岁,不育年限(3.9±1.5)年;白细胞精子症不育组女方平均年龄(28.5±3.4)岁,不育年限(4.3±1.2)年,组间比较无显著性差异(P>0.05)。
2.2 两组男性精液参数比较
精液白细胞正常不育患者组和白细胞精子症不育患者组两组男方的精液量、精子浓度、处理前后前向运动精子总数,无显著性差异(P>0.05);两组男方精子正常形态率和精子DNA碎片指数有显著性差异(P<0.05),白细胞精子症不育组的正常形态率和精子DNA碎片指数显著高于精液白细胞正常不育组。
2.3 两组患者周期妊娠率的比较
共326个周期,获得妊娠35个周期,周期妊娠率10.7%。精液白细胞正常不育患者组279个周期,妊娠30个周期,周期妊娠率10.8%;白细胞精子症不育患者组47个周期,妊娠5个周期,周期妊娠率10.6%,组间妊娠率比较有统计学差异(P>0.05)。
3 讨论
根据世界卫生组织(WHO)的规定,精液白细胞数>1×106/mL可诊断为白细胞精子症,白细胞增多说明存在炎症反应。炎症反应的一个重要影响就是产生了大量的氧自由基,升高的活性氧会对精子膜产生毒性,从而对精子造成损伤,进一步影响了男性的生殖力。发表在生殖生物学权威杂志Fertility & Sterility的文章指出,当精液中白细胞数目<106/mL时,白细胞可以提高精子的生殖力和IVF的临床妊娠率;一旦精液中白细胞数目>106/mL时,即白细胞精子症患者的IVF临床妊娠率显著降低。然而有文献报道白细胞精子症对IUI的妊娠率有提高作用。以上两个研究探讨的是不同的辅助生殖手段,即体外受精与人工授精,着眼点都在于白细胞增多对精子的生育力影响,但在研究中有不同的结果,我们对此产生了兴趣。本研究旨在分析本中心白细胞精子症不育患者的精液指标,并探讨其对IUI结局是否产生影响。通过常规的精液分析发现,白细胞增多并不影响精液量、精液浓度以及前向运动精子的量。2010年Arata de Bellabarba等发表的研究认为,精液白细胞浓度与精液量、精子密度、活力、授精能力成反比。在本研究中,我们将数据按照WHO的规定分为了两组,这与Arata de Bellabarba细致划分白细胞精子症的策略不同,这可能是我们没有发现白细胞增多影响精液常规参数的原因。所以,在将来可以通过扩充数据量,按照Arata de Bellabarba分组策略研究进行深入的分析。虽然在精液常规分析中没发现差异,但在比较精子正常形态时发现,白细胞精子症不育患者的精子正常形态率显著降低,并且精子DNA碎片指数也表现出碎片增多,这与Arata de Bellabarba的结论较一致,说明白细胞增多可能破坏了精子的DNA完整性,进而影响了正常形态,最终影响其授精能力。有关白细胞精子症致病机理的研究主要集中在其活性氧压力方面。2014年Flint等出版的专著中详细介绍了白细胞精子症与活性氧压力的关系。其指出大量活性氧的产生一方面对精液参数产生了不良影响,比如精子染色质改变、精子形态异常等;但另一方面,活性氧也是有益的,因为精原细胞以及精子需要持续的能量供应来满足生存和活力。这在一定程度上解释了目前有关白细胞精子症研究获得的不尽相同的结论,如Saleh等认为白细胞精子症患者活性氧(ROS)产生明显增高,精子运动能力降低;Henkel等发现白细胞产生的外源性ROS对精子活力和DNA完整性有很大影响;Barraud-Lange等则发现精液中适度的白细胞数目能力高体外受精的妊娠率。Barraud-Lange等提到的适度的白细胞数目范围是<106/mL,当白细胞数目超过该值,体外受精的妊娠率受到了影响。由于体外受精和人工授精的技术存在差异,本研究探讨了白细胞数目>106/mL时人工授精妊娠率的变化。本研究分析白细胞精子症不育患者行IUI临床妊娠率时发现,白细胞精子症的患者IUI临床妊娠率与对照组基本持平,并无显著性差异。这一结果与靖涛等的研究结果存在一定的差异。可能的原因是本研究样本量较小,对白细胞精子症患者的分组不够细致有一定关系。在后续研究和分析时,加大数据量,对白细胞精子症患者进一步分组,这样可能会得到更明确的结论。综上所述,白细胞精子症不育患者对IUI助孕结局未见明显不良影响,鉴于本次研究样本量小、分组不尽细致、女方因素、IUI中未区分自然周期与促排周期等相关因素的影响,所得出白细胞精子症患者行IUI治疗妊娠率无影响的结论可能会有一定的局限性,对白细胞精子症对不育的影响仍需更进一步的研究。
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