朗格汉斯细胞与尖锐湿疣的发病与复发机制的探讨
文章导读:选取尖锐湿疣组30例,正常对照组10例,采用免疫组化法对尖锐湿疣组织和正常组织进行CD1a、S-100蛋白、HLA-DR检测,统计表达阳性的LC数量并观察其形态。结果:尖锐湿疣组织中的CD1a、S-100蛋白、HLA-DR阳性的LC表达均比正常组织降低。复发组与无复发组的表达也有差异。 |
性传播疾病目前在我国仍广泛流行,其中尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)的发病率居高不下,在某些流行病学调查中显示其发病率为八大性病之首。大量研究结果表明人类免疫反应,尤其是细胞免疫反应是临床上决定CA发病和转归的重要原因。而朗格汉斯细胞(Langerhans cells, LC)作为一种主要的免疫应答细胞,在对抗CA的主要病源人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 感染中起重要作用。本研究通过检测尖锐湿疣组织标本中多种代表LC不同功能状态的表面标志CD1a、S-100、HLA-DR,并且在随访中观察复发组及无复发组之间的差异,以探讨它们在尖锐湿疣发病与复发中的作用。
1 对象与方法
1.1 对象
30例尖锐湿疣均来自2012年9月至2014年2月期间在丽水市人民医院皮肤性病科门诊就诊患者,经本人知情同意,并经医院伦理委员会许可,符合2000年卫生部疾病控制司制订的《性病诊断标准与治疗方案》中CA诊断标准,同时排除妊娠,严重肝、肾、心血管及自身免疫性疾病等可能影响机体免疫力的疾病。确诊后予CO2激光治疗,并留取较为完整组织标本,术后常规干扰素软膏外用3个月。随访3个月,观察其复发情况,回顾性分为复发组和无复发组。入组患者中,女11例,男19例, 病程约3周~9个月,平均年龄29岁(16~52岁),CA组织取自包皮、肛周、女性外阴等部位。正常对照组织10例均来自2013年间在我院泌尿外科包皮环切术的正常皮肤。对照组平均年龄23岁(14~40岁)。取得的标本置于10%的甲醛溶液中然后送病理,行HE染色及免疫组化染色检查。
1.2 试剂
鼠抗人CD1a、S-100、HLA-DR、免疫组化SP试剂盒及DAB显色液均购于北京中杉金桥生物技术有限公司(批号分别为13670110,13T71508,13111A08,k136830B)。
1.3 方法
取尖锐湿疣组织和正常对照组织, 用 10%福尔马林溶液(购于国药集团化学试剂有限公司,货号10010018)固定后石蜡包埋, 常规 5μm 连续切片, 常规脱蜡后按第二代免疫组化试剂盒说明书进行CD1a、S-100、HLA-DR免疫组化染色, 以PBS代替一抗做空白对照, 以人正常包皮组织为阳性对照。结果判断:在10×40倍光镜下,随机选取 5 个视野, 对染色后的切片中的 CD1a+LC、S-100+LC、HLA-DR+LC 进行观察和记数。
1.4 统计学处理
采用SPSS19.0软件进行统计分析,两组间进行独立样本t检验,以P<0.05为有统计学差异。
2 结果
2.1 尖锐湿疣组织与正常组织中CD1a+LC比较
对照组正常组织中10×40倍光镜下, CD1a+LC数目为16~39个, 平均(21.10±12.25)个,主要分布在棘层。CD1a+LC胞体呈类圆形或不规则形,细胞突起相对较多或长。实验组尖锐湿疣皮损中 CD1a+LC 数量相对减少, 数目为4~31 个,平均(13.23±9.15) 个,分布变得不规则,在表皮下部相对多见,同时它的胞体变小,细胞突起减少。见图2。
2.2 尖锐湿疣与正常组织中S-100+LC比较
对照组正常组织10×40 倍光镜下, S-100+LC数目为:11~35个, 平均(15.54±7.06) 个。尖锐湿疣组织中S-100+LC数目为2~14个,平均(8.36±5.07)个. 典型的树突状细胞少见,细胞形态呈为类圆形或点状。
2.3 尖锐湿疣与正常组织中HLA-DR+LC比较
正常皮肤组织中HLA-DR(+)LC 分布比较规则,主要表达在表皮棘层和基底层,10×40倍光镜下, HLA-DR+LC数目为:9~35个,平均(18.62±9.09)个。尖锐湿疣皮损表皮中HLA-DR(+)LC数量较少,HLA-DR+LC数目为:3~20个, 平均(9.71±7.52) 个。分布不规则,典型的树突状细胞减少,部分LC胞体变小,细胞突起较少或消失。
2.4 随访3个月观察复发率的结果
无复发13例(43.33%),复发17例(56.67%),3个月内平均复发次数为1.41。
3 讨论
尖锐湿疣是由人类乳头瘤病毒感染引起的一种性传播疾病,在我国发病率高、传染性强、危害大,并且具有高复发率,其复发率在合并其他性病或免疫缺陷疾病时更显著。HPV有多种类型,引起尖锐湿疣的常见类型是HPV6、11型,少见为HPV16、18型,后者又是女性宫颈癌的可能致病原因。尖锐湿疣的发病与高复发率与HPV的持续感染有关,而后者又与机体的免疫反应下降特别是细胞免疫的下降以及机体的免疫监视功能缺陷密切相关。也就是说机体对于HPV感染不能建立十分有效的免疫应答,存在着免疫逃逸现象。朗格汉斯细胞是一种主要的免疫细胞,它能摄取、加工抗原并将其递呈给T辅助细胞,从而启动免疫应答。朗格汉斯细胞携带CD1a、HLA-DR、S-100蛋白等表面标志,因此本研究采用免疫组化法检测尖锐湿疣组织和正常包皮组织中CD1a+LC、S-100+LC、HLA-DR+LC的表达来比较LC细胞数目和功能情况。本研究结果表明,在尖锐湿疣组织中CD1a+LC、S-100+LC、HLA-DR+LC的表达均明显低于正常组织中的表达水平(P<0.05),并且部分LC细胞胞体变小,细胞突变钝或消失,这与国内外相关研究一致。同时,在随访3个月后观察其复发情况,根据复发组与无复发组的比较证实了CD1a+LC、S-100+LC的数目多少与复发率相关(P<0.05),表明不同免疫抑制程度其复发率也不同。在本结果中HLA-DR+LC在复发组与无复发组中无统计学差异(P>0.05),当然,可能与标本数目限制有关,尚需加大标本量进一步研究。在正常皮肤组织中由CD1a+LC在表皮形成免疫网络,而在本研究中我们发现尖锐湿疣皮损中LC不单纯存在数量上的异常,还由于S-100蛋白的缺失导致LC细胞功能的异常,因而导致了尖锐湿疣微环境中免疫抑制的状态,HLA-DR低表达则说明DC提呈外源性抗原能力低下。正是LC数量和功能的缺损限制了特异性免疫反应的启动,这可能与尖锐湿疣的发病与复发相关。同时通过了解尖锐湿疣中LC的生物学特性,也为我们探索通过皮肤给药途径改变细胞免疫状态及靶向疫苗等治疗指出方向。
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