尖锐湿疣SHP-1、EGFR表达与预后的关系
文章导读:选取我院皮肤科门诊2013年3月至2015年3月尖锐湿疣患者共90例,我院整形科正常皮肤90例作为正常皮肤组,基底细胞癌和鳞状细胞癌90例(各45例)作为恶性肿瘤组。采用免疫组化技术测定SHP-1和EGFR在三组皮肤组织中的表达水平。结果:尖锐湿疣组组织中的的SHP-1吸光度值显著低于正常皮肤组,EGFR吸光度值显著高于正常皮肤组(P<0.05);恶性肿瘤组组织中的的SHP-1吸光度值显著低于尖锐湿疣组,EGFR吸光度值显著高于尖锐湿疣组(P<0.05)。SHP-1在正常皮肤组组织中染色强度和阳性表达率最高,恶性肿瘤组组织中染色强度和阳性表达率最低,P<0.01。EGFR在恶性肿瘤组组织中染色强度和阳性表达率最高,正常皮肤组组织中染色强度和阳性表达率最低,P<0.01。在尖锐湿疣组组织中,SHP-1低表达时,EGFR相应升高,两者呈负相关(r=-0.74,P<0.05)。 |
尖锐湿疣(condyloma acuminatum, CA)是由人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)感染所致皮肤黏膜良性赘生物,是临床常见的、易反复发作的、发病率较高的性传播疾病,其表现为上皮细胞异常增生。蛋白酪氨酸磷酸酶-1(srchomology domain 2 contining protein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)是一种非跨膜酪氨酸磷酸酶,能够对生长因子受体酪氨酸激酶的脱磷酸化发挥负调控性,阻止细胞增生。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一种跨膜糖蛋白,广泛分布在哺乳动物上皮细胞膜中,具有酪氨酸激酶活性。相关文献指出,SHP-1与EGFR的过度表达、自我激活与肿瘤发生具有密切联系。本研究对我院皮肤科收治的尖锐湿疣患者、正常皮肤者与基底细胞癌和鳞状细胞癌患者的蛋白酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)和表皮生长因子受体(EGFR)采用免疫组化技术进行检测,对比分析其表达水平,并探讨其对尖锐湿疣预后的影响。
1 资料和方法
1.1 一般资料
选取我院皮肤科门诊2013年3月至2015年3月尖锐湿疣患者共90例,所有患者均经病理活检确诊为尖锐湿疣。排除标准:(1)合并自身免疫性疾病或其他皮肤病;(2)入组前6个月内接受过局部或全身免疫抑制剂治疗。同时选取我院整形科正常皮肤90例作为正常皮肤组,基底细胞癌和鳞状细胞癌90例(各45例)作为恶性肿瘤组。其中尖锐湿疣组90例,男48例,女42例;年龄18~61岁,平均年龄(29.91±2.78)岁。正常皮肤组90例,男46例,女44例;年龄17~63岁,平均年龄(30.17±2.49)岁。恶性肿瘤组90例,男49例,女41例;年龄20~62岁,平均年龄(29.54±2.46)岁。三组一般情况无显著差异,P>0.05。本次研究均征得患者同意,并签署知情同意书。
1.2 实验方法
实验试剂及仪器:鼠抗人表皮生长因子受体单克隆抗体和兔SHP-1多克隆抗体购自福州迈新试剂公司(产品批号:MST-8001),YB-6型生物组织包埋机、YB-6B型烤片机购自湖北亚光医用电子技术研究所,Leica TP1020型自动脱水机和RM2125切片机购自德国Leica公司,BX50 型倒置显微镜购自日本Olympus公司。
标本制备及染色:选取所有患者阴道、子宫颈等部位的湿疣组织做成涂片,制作成帕氏染色,三组标本经10%甲醛溶液固定,石蜡包埋后,连续以5μm厚度切片,进行免疫组化染色。石蜡切片脱蜡之后,滴加过氧化物酶阻断液,常温孵育10min后,滴加一抗,37℃湿盒中孵育60min,滴加二抗,常温孵育10min后,滴加过氧化物酶-链霉亲和素溶液,常温孵育10min。每步之间用PBS漂洗3次,完成后,DAB显色,细胞核以苏木精复染,封片采用中性树胶。阳性对照为已知阳性片,阴性对照为被PBS代替的一抗。
1.3 观察指标
SHP-1和EGFR阳性细胞均为细胞质或细胞膜有淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。其中染色强度评分为:0分,阴性;1分,弱阳性;2分,阳性;3分,强阳性。阳性细胞数评分为:0分,无阳性细胞;1分,阳性细胞数<25%;2分,阳性细胞数25%~50%;3分,阳性细胞数>50%。两项相加,最后得分3~6分为免疫组化染色阳性。每位入选者选取一张阳性切片,光镜下(×400倍)选取5个视野,采用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统,测定阳性细胞的吸光度值,即为蛋白的相对含量。对比三组SHP-1、EGFR的吸光度值、染色强度分布和阳性表达率。
1.4 统计学方法
采用SPSS 18.0软件分析数据,以(x±s)表示计数资料,采用t检验分析每两组之间差异;以[n(%)]表示计量资料,采用χ2检验分析组间差异;采用Pearson相关系数分析相关性;P<0.05,差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 SHP-1、EGFR在尖锐湿疣、正常皮肤和恶性肿瘤组织中吸光度值对比
尖锐湿疣组组织中的SHP-1吸光度值显著低于正常皮肤组,EGFR吸光度值显著高于正常皮肤组(P<0.05);恶性肿瘤组组织中的SHP-1吸光度值显著低于尖锐湿疣组,EGFR吸光度值显著高于尖锐湿疣组(P<0.05)。
2.2 SHP-1、EGFR在尖锐湿疣、正常皮肤和恶性肿瘤组织中染色强度分布对比
SHP-1在正常皮肤组组织中染色强度最高,恶性肿瘤组组织中染色强度最低,χ2=25.8170,P=0.0002。EGFR在恶性肿瘤组组织中染色强度最高,正常皮肤组组织中染色强度最低,χ2=66.8435,P=0.0000。
2.3 SHP-1、EGFR在尖锐湿疣、正常皮肤和恶性肿瘤组织中阳性表达率对比
SHP-1在正常皮肤组组织中阳性表达率最高,恶性肿瘤组组织中阳性表达率最低,χ2=15.5354,P=0.0004。EGFR在恶性肿瘤组组织中阳性表达率最高,正常皮肤组组织中阳性表达率最低,χ2=25.8353,P=0.0000。
2.4 尖锐湿疣组组织中SHP-1和EGFR的相关性
在尖锐湿疣组组织中,SHP-1低表达时,EGFR相应升高,两者呈负相关(r=-0.74,P<0.05)。
3 讨论
尖锐湿疣是临床常见的性传播疾病,其发病主要因素为HPV感染,与患者机体细胞免疫功能较弱、病毒潜伏感染、局部炎症性疾病相关。尖锐湿疣好发于肛周、性器官以及乳头、口腔等其他皮肤黏膜,主要通过性接触传染、间接接触传染、母婴传播等途径传播,诱发机体内部出现疣体,对患者的生命健康造成严重威胁,早期诊断对患者预后具有重要意义。尖锐湿疣是良性疾病,但细胞增殖的速度比较快,与实体肿瘤相似,其生长需要丰富的血管血液营养供应,形成新生血管,促进微血管增殖与管腔扩张。尖锐湿疣的发病机制尚未明确,相关研究指出SHP-1与EGFR参与了尖锐湿疣发病,且在疾病发展过程中的细胞生长、信号传导和周期调控中发挥了重要作用。
SHP-1是属于68ku的胞质蛋白,通过SH2结构域和细胞EGFR的酪氨酸抑制基序(ITIM)特异性可以相互结合,对受体构象进行改变,能够促使下游蛋白去磷酸化,阻止生长信号,对凋亡信号和细胞增殖产生抑制性。本研究中SHP-1在正常皮肤组组织中染色强度和阳性表达率最高,恶性肿瘤组组织中染色强度和阳性表达率最低,这提示低表达的SHP-1参与了CA疾病的发展,且减弱了SHP-1的负调控作用,增加了下游受体酪氨酸激酶活性,对受体介导的有丝分裂信号传导通路起到增强作用,严重影响尖锐湿疣细胞增殖与分化,这与Leval A等相关报道类似。
EGFR是一种生存于细胞膜表面的跨膜糖蛋白,是角质形成细胞(kc)自泌生长因子的主受体,其分子质量为170ku,具有较强的酪氨酸激酶活性。EGFR作为表皮多种功能的基本调节剂,可以与其配体相互结合会产生二聚化,对kc增殖与分化起到调节作用,控制表皮的自身稳定性。在肿瘤成长过程中,EGFR保持基底层细胞增殖,有助于预防过早终末分化,启动细胞生长周期,激活受体酪氨酸蛋白激酶所致胞质区酪氨酸残基磷酸化,激活下游多条信号通路。本研究中EGFR在恶性肿瘤组组织中染色强度与阳性表达率最高,正常皮肤组组织中染色强度与阳性的表达率最低,这说明尖锐湿疣患者组织中的EGFR表达过度,且极易诱发下游信号异常活化,通过异常活化的EGFR通路改变尖锐湿疣细胞生长特性,抑制细胞凋亡,对细胞的增殖与分化产生刺激作用。本研究发现,在尖锐湿疣组组织中,SHP-1低表达时,EGFR相应升高,两者呈负相关,这说明SHP-1与EGFR存在密切联系,其中SHP-1能够通过脱磷酸化直接作用于EGFR,对其激酶活性产生抑制性。相关文献报道,尖锐湿疣患者组织中的HPV诱导SHP-1低表达,削弱其负调控作用,增强EGFR活性,且高表达的EGFR与增强的信号通路活性能够传递分裂增殖信号于细胞,对细胞分化的正常调控产生严重的干扰,最终导致尖锐湿疣细胞过度增殖。
综上所述,在尖锐湿疣中SHP-1低表达和EGFR高表达和尖锐湿疣细胞增殖有关,且SHP-1与EGFR的表达呈负相关,临床可通过检测以上因子判断尖锐湿疣有无恶变倾向,以SHP-1与EGFR为靶点进行免疫治疗将成为临床治疗尖锐湿疣的新思路。
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